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猪传染性胸膜肺炎病原分离鉴定及防治试验

作者:habao 来源:未知 日期:2018-3-25 3:00:42 人气: 标签:液体菌种摇床
导读:河南某猪场,在育肥猪中,发生了以体温升高、呼吸困难、具有肺炎和胸膜炎典型症状和病变的传染病,笔者进行了病原分离鉴定,并在猪场进行了防治试验,报告如下。…

  河南某猪场,在育肥猪中,发生了以体温升高、呼吸困难、具有肺炎和胸膜炎典型症状和病变的传染病,笔者进行了病原分离鉴定,并在猪场进行了防治试验,报告如下。

  1.2主要培养基特制的牛心浸汁琼脂平板(含10%灭能的马血清及100μg/ml NAD)、特制的牛心浸汁液体培养基(含10%灭能的马血清及100μg/ml NAD)、微量生化发酵管等。

  1.4细菌的分离培养将病科接种于特制的牛心浸汁琼脂平板,置烛缸内,37℃培养24h,观察培养结果。

  1.5分离菌株特性检查(1)取纯培养的菌落,涂片作常规革兰氏染色镜检。(2)在一系列生化培养基中加入NAD,接入浓厚待检菌,37℃培养18 h,观察结果。(3)用不加NAD和马血清的牛心浸汁琼脂平板,将待检物均匀涂布于琼脂面上,用能够产生生长因子的金葡萄球菌ATCC25923菌株培养物划线℃培养过夜,观察卫星生长现象。(4)在加NAD的牛心浸汁琼脂培养基中加入5%脱纤绵羊血制成平板,接种培养物后经37℃培养18 h,观察溶血情况。(5)将分离菌株制成菌悬液,给3只18~20 g小鼠分别腹腔注射0.3 ml(约含5亿活菌),另2只腹腔注射生理盐水作对照,观察发病情况1周,并从死亡鼠肝脏分离细菌并鉴定。

  药敏试验将菌落用灭菌生理盐水洗脱,取0.2ml在特制的牛心浸汁琼脂平板上均匀涂布,选用氟苯尼考、强力霉素、恩诺沙星、青霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、泰乐菌素七种药敏纸片均匀贴在平板上,置37℃培养24 h,观察抑菌环大小。

  疫苗研制(1)用分离菌种接种于特制的牛心浸汁液体培养基,37℃100 r/min的摇床震荡培养过夜,使菌液的含菌量为5.0×109个/ml,加入0.2%的福尔马林充分混匀,37℃灭活48h,加适量Tween80成水相。(2)将10号白油,Span80、硬脂酸铝按一定比例混合,15磅、30min高压灭菌即为油相,将油相加入高速组织捣碎机,然后缓慢加入一定量的细菌液,乳化5min,分装加塞、压铝盖,并对该油乳剂苗进行无菌检验、安全检验等。

  自家血清制备用已康复的病猪,屠宰时无菌操作采集血清,将血清进行灭活细菌、病毒脱毒处理,并做无菌检验和动物试验。

  防治试验(1)取发病猪40头(5日龄),随机分为2组,第1组用氟苯尼考20 mg/kg体重肌肉注射,1天1次,连用5天,同时在发病时注射自家血清30 ml/头,第2组用氟苯尼考20mg/kg体重肌肉注射,1天1次,连用5天,观察治疗效果1周。(2)取上述发病猪场的15日龄乳猪90头,随机分为3组,第1组为油乳剂灭活苗免疫组,在15日龄时1 ml/头,在35日龄时2ml/头,颈部深部肌肉注射。第2组为药物预防组,25日龄时用氟苯尼考25mg/kg饲料浓度拌料,连用1周,第3组为空白对照组,对试验猪按常规进行猪瘟、猪链球菌病、猪伪狂犬病免疫,25日龄断奶,并定期消毒,连续观察60天,及时记录各组发病情况和临床表现。

  生化试验结果该分离菌株对葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和果糖发酵产酸,尿素酶试验阳性反应呈粉红色,可在浓厚菌接种后8min出现,随后越来越明显。

  小鼠试验小鼠均在接种后18 h发病,50 h左右死亡1只,从死鼠肝脏中分离到较纯的APP,余者观察结束后全部康复。

  药敏试验结果高度的有氟苯尼考、强力霉素;中度的有丁胺卡那霉素、泰乐菌素;低的有恩诺沙星、环丙沙星、青霉素。

  油乳剂灭活菌研制及自家血清制备该油乳剂灭活苗经无菌检验、安全检验均正常,该自家血清经无菌检验和动物试验均正常。

  防治试验(1)第1组同时使用氟苯尼考和高免血清治疗,1周后还有1头猪有呼吸道症状,剖检见有肺炎和胸膜炎病变,19头猪痊愈,治愈率为95%,第2组使用氟苯尼考,1周后还有4头猪有呼吸道症状,剖检见有肺炎和胸膜炎病变,16头猪痊愈,治愈率为80%。(2)预防试验:第1组使用疫苗免疫后60天,猪只正常,第2组使用药物预防后,在60天内,共有3头猪出现呼吸道症状,剖检后可见肺炎和胸膜炎病变,发病率为10%;第3组对照,在60天后,共有6头猪出现呼吸道症状,剖检后可见肺炎和胸膜炎病变,发病率为20%。

  该猪场此次发生的传染病,根据流行病学、临床症状、剖检变化结合病原分离、生化试验、卫星生长现象、溶血试验、动物试验确诊为胸膜肺炎放线杆菌感染。

  试验结果表明,猪场发病后,使用自家血清同时配合抗生素,治疗效果良好,在进行免疫预防时,使用自家油乳剂灭活苗预防效果良好,单纯采用抗生素预防和治疗效果均不甚理想。

  该病主要通过空气,合理调节饲养密度,搞好猪舍卫生,保持良好的通风和适宜的温度,也是预防猪传染性胸膜肺炎发生的重要因素。

  

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